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Browsing Docencia by UPV Entity "Centro Avanzado de Microbiología de Alimentos"
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- PublicationActivación de Mastocitos(Universitat Politècnica de València, 2019-07-02T08:35:08Z) Sirera Pérez, Rafael; Dpto. de Biotecnología; Centro Avanzado de Microbiología de Alimentos; Escuela Técnica Superior de Ingeniería Agronómica y del Medio NaturalObjeto de aprendizaje que describe los mecanismos que conducen a la activación de los mastocitos y su repercusión biológica
- PublicationActividad antifúngica de tres aceites esenciales contra hongos aislados de pintura mural(Universitat Politècnica de València, 2019-10-24) Río Oliver, Cristina del; Regidor Ros, Jose Luis; Montes Estellés, Rosa Mª; Dpto. de Biotecnología; Dpto. de Conservación y Restauración de Bienes Culturales; Facultad de Bellas Artes; Instituto Universitario de Restauración del Patrimonio; Centro Avanzado de Microbiología de Alimentos; Escuela Técnica Superior de Ingeniería Agronómica y del Medio Natural[ES] Los microorganismos juegan un papel muy importante en el deterioro del patrimonio cultural debido a los daños estéticos, físico mecánico y químicos (asimilatorios y desamilatorios) que pueden causar. El objetivo del presente trabajo es estudiar productos naturales de menor toxicidad y mayor respeto con el medio ambiente que los biocidas convencionales, que cumplan las mismas funciones y sean capaces de controlar los crecimientos biológicos. Para llevar a cabo este estudio se utilizaron 6 géneros diferentes de hongos, Aspergillus niger, Penicillium sp., Cladosporium sp., Trichoderma sp., Alternaria sp. y Absidia sp., todos ellos fueron aislados de las pinturas murales situadas en la ermita de Santa María de Arcos en Tricio (La Rioja, España) datadas entre el siglo XI y XII. Durante la investigación se seleccionaron tres aceites esenciales con buenas propiedades antifúngicas, de acuerdo a la bibliografía consultada, aceite esencial de Orégano, Tomillo y Clavo. Primero se comprobó la actividad antifúngica de los aceites esenciales sobre todos los hongos en placas Petri con medios Sabouraud Detroxe Agar (SAB), empleando como control positivo Cloruro de Benzalconio (neo ®Desogen). Posteriormente se comprobó la eficacia de los aceites emulsionados en diferentes concentraciones (100%, 50%, 10%, 5%, 1%). Finalmente se comprobó la efectividad de la concertación inhibidora mínima sobre la superficie de una probeta de características similares a las pinturas de este estudio.
- PublicationActividad antimicrobiana y antibiofilm de compuestos de aceites esenciales en cepas de Escherichia coli presentes en la industria cárnica(Universitat Politècnica de València, 2019-10-25) Silva Janeiro, Sara Da; Jiménez Belenguer, Ana Isabel; Ruiz Rico, María; Dpto. de Biotecnología; Centro Avanzado de Microbiología de Alimentos; Escuela Técnica Superior de Ingeniería Agronómica y del Medio Natural[ES] La contaminación microbiana representa un riesgo para la salud pública. Cada vez se detectan más resistencias bacterianas en el ámbito de la industria alimentaria y urge lograr alternativas para combatir esta problemática. Uno de los principales mecanismos de resistencia desarrollado por las bacterias es la formación de biopelículas o biofilms. Entre los microorganismos patógenos más frecuentemente encontrados en forma de biofilm, destaca Escherichia coli. En este estudio se analizóla capacidad antimicrobiana de diversos componentes de aceites esenciales (carvacrol, eugenol, timol y vainillina) frente a cepas de E.coli aisladas en superficies de una industria cárnica. Por otra parte, se evaluó, también, el efecto anti-biofilm de dichos compuestos en tres superficies: poliestireno, polietileno y acero inoxidable. Los cuatro compuestos de aceites esenciales fueron efectivos en la reducción de la actividad bacteriana y en la inhibición de la formación de biofilms de las cepas de E.coli analizadas. Los hallazgos encontrados indican que los componentes de aceites esenciales podrían ser aplicados en un futuro como alternativas válidas a los agentes biocidas convencionales.
- PublicationActivitat desnitrificant de fraccions cel·lulars de Pseudomonas stutzeri utilitzada en tasques de bioneteja en pintura mural(Universitat Politècnica de València, 2020-10-06) Martí Espí, Miguel; Montes Estellés, Rosa Mª; Rodrigo Bravo, Ismael; Instituto Universitario Mixto de Biología Molecular y Celular de Plantas; Dpto. de Biotecnología; Centro Avanzado de Microbiología de Alimentos; Escuela Técnica Superior de Ingeniería Agronómica y del Medio Natural[CA] En els últims anys, s'ha investigat i treballat a la utilització d'aplicacions biotecnològiques per a la restauració d'obres d'art, particularment en la neteja de pintures murals amb l'aplicació d'aquests bacteris vius, el que s'ha denominat bioneteja en els treballs de conservació de pintura mural. En el Laboratori de Microbiologia de la UPV s'ha desenvolupat aquesta tècnica i s'ha aplicat a les pintures murals de les esglésies de Sant Nicolau i dels Sants Joans de València, utilitzant Pseudomonas stutzeri per a l'eliminació de crostes de nitrats insolubles, obtenint-se resultats espectaculars. No obstant això, l'ús de bacteris vius limita molt la tècnica i els treballs en els quals es pot aplicar, per tant, es considera interessant investigar si és possible utilitzar els bacteris inactius o una fracció d'ells i que es conserve l'activitat desnitrificant. Una vegada identificada la capacitat desnitrificant del cep aïllat, que implica un primer pas de reducció de nitrat a nitrit mitjançant l'acció de una nitrat reductasa, es procedeix a la identificació i caracterització d'aquesta activitat enzimàtica. Per a això, s'estudia la possibilitat de realitzar extractes enzimàtics a partir dels cultius bacterians, estudiant l'efectivitat de diferents mètodes de disrupció cel·lular descrits a la bibliografia (ruptura per ultrasons, ús de detergents, ús de cicles de congelació/descongelació) amb l'objectiu d'obtenir un lisat cel·lular que continga l'activitat nitrat reductasa. S'investiga la compartimentalització de la dita activitat mitjançant fraccionament subcel·lular utilitzant diferents estratègies. Del lisat total (TL) s'obtindrà la fracció periplasmàtica i citosòlica (CPP) i la fracció membranosa total (TM), la qual pot dividir-se en les seues corresponents fraccions de membrana externa i interna. A més a més, s'investiga bibliogràficament la possibilitat que aquesta activitat siga part del proteoma periplasmàtic, estudiant la preparació selectiva de proteïnes periplasmàtiques mitjançant diferents procediments, que deixarien les proteïnes periplasmàtiques en la fracció sobrenedant després d'una centrifugació. Amb les dades obtingudes en bibliografia, es valorarà la possibilitat d'obtenir una preparació purificada de l'activitat nitrat reductasa de Pseudomonas stutzeri que constitueixi el punt de partida d'una aplicació biotecnològica per a l'eliminació de crostes de nitrats en processos de restauració d'obres d'art.
- PublicationAislamiento y caracterización de especies de bacillus procedentes de compost y suelo con capacidad inhibidora de hongos fitopatógenos(Universitat Politècnica de València, 2015-12-17) Martínez Jiménez, Jorge José; Jiménez Belenguer, Ana Isabel; Cuesta Amat, Gonzalo; Dpto. de Biotecnología; Centro Avanzado de Microbiología de Alimentos; Escuela Técnica Superior de Ingeniería Agronómica y del Medio NaturalEl uso y la dependencia de los métodos de control químico utilizados habitualmente contra agentes fitopatógenos ha promovido distintas alternativas, una de estas alternativas, el control biológico, se basa en el aprovechamiento de las interacciones entre microorganismos como la competencia y el antagonismo. Así mismo la utilización del compost como alternativa a los fertilizantes químicos además de no perjudicar al medio ambiente, permite reutilizar residuos orgánicos de todo tipo. Es por ello que se plantea en este trabajo el estudio de las propiedades antagonistas de microorganismos aislados que proliferan en el compost frente a microorganismo fitopatógenos.
- PublicationLos alimentos mínimamente procesados y su rol en la generación y propagación de las resistencias antibióticas(Universitat Politècnica de València, 2020-09-09) Alcázar Contreras, María de los Ángeles; Jiménez Belenguer, Ana Isabel; Dpto. de Biotecnología; Centro Avanzado de Microbiología de Alimentos; Escuela Técnica Superior de Ingeniería Agronómica y del Medio Natural[ES] Las resistencias antibióticas son una de las mayores amenazas para la salud pública en la actualidad. Si bien el principal factor de riesgo en la emergencia de microorganismos resistentes a antibióticos parece ser la presión selectiva ejercida por la exposición a sustancias antibióticas, existe una preocupación creciente por la contribución de la Industria alimentaria a este problema y por la transmisión de patógenos resistentes a través de la cadena alimentaria. En este estudio nos centraremos en los alimentos mínimamente procesados. El trabajo consiste en una revisión bibliográfica de la información disponible hasta el momento. Este tipo de alimentos reúnen una serie de características que los hacen especialmente susceptibles de contribuir a la transmisión de bacterias resistentes a los antibióticos. Por un lado, al consumirse crudos o haber recibido únicamente tratamientos suaves, encaminados a reducir en parte la carga microbiana o alargar la fase de latencia de los microorganismos responsables del deterioro del producto, pueden ser vehículo de bacterias, tanto comensales como patógenas, portadoras de genes de resistencia. Además, las bacterias presentes en estos alimentos se ven expuestas, a lo largo del procesado y durante la vida útil del producto, a tratamientos subletales y condiciones ambientales estresantes que pueden desencadenar respuestas adaptativas y mecanismos de reparación, aumentando significativamente la probabilidad de adquirir resistencia a los antibióticos.
- PublicationAnálisis de alteraciones de splicing en genes de predisposición germinal a neoplasia mieloide(Universitat Politècnica de València, 2024-09-05) López Nieto, Pablo; Giraldo Reboloso, Esther; Liquori, Alessandro; Martínez Valiente, Cristina; Dpto. de Biotecnología; Centro Avanzado de Microbiología de Alimentos; Escuela Técnica Superior de Ingeniería Agronómica y del Medio Natural[ES] Las neoplasias mieloides (NMs) con predisposición germinal se diagnostican cada vez con más frecuencia, constituyendo aproximadamente el 10% de los casos de síndrome mielodisplásico (SMD) y leucemia mieloide aguda (LMA). Las mutaciones germinales en genes como GATA2, ETV6, DDX41, SAMD9 y SAMD9L están implicadas en esta predisposición. La deficiencia de GATA2, un síndrome genético raro resultado de mutaciones en el gen GATA2, impacta significativamente en el desarrollo y función de las células sanguíneas y del sistema inmunológico. Caracterizada por inmunodeficiencia, fallo de médula ósea, SMD, enfermedad pulmonar, linfedema, y una mayor susceptibilidad a infecciones y cánceres, la deficiencia de GATA2 se manifiesta a través de un amplio espectro de mutaciones, con más de 150 variantes distintas identificadas hasta la fecha. Mutaciones recurrentes incluyen los cambios missense T354M, R398W y R396W. Las mutaciones abarcan variantes nulas o missense, cambios en regiones no codificantes y reguladoras, e incluso mutaciones sinónimas que afectan el procesamiento de ARN y contribuyen a la deficiencia de GATA2. A pesar de las numerosas mutaciones identificadas, los estudios funcionales siguen siendo limitados. En este proyecto, nuestro enfoque es emplear ensayos in vitro para evaluar el impacto de las mutaciones del exón 5 del gen GATA2 en el splicing del ARN, contribuyendo a una comprensión más profunda de la patogénesis de la deficiencia de GATA2.
- PublicationAnálisis de expresión de factores proinflamatorios e inmunológicos en carcinoma de células de Merkel(Universitat Politècnica de València, 2018-09-18) Díaz Pozo, Pedro; Sirera Pérez, Rafael; López Guerrero, José Antonio; Dpto. de Biotecnología; Centro Avanzado de Microbiología de Alimentos; Escuela Técnica Superior de Ingeniería Agronómica y del Medio Natural[ES] El carcinoma de células de Merkel es un raro y agresivo tumor neuroendocrino cutáneo. Está relacionado con la exposición a radiación ultravioleta y a la infección por el polyomavirus de células de Merkel. A pesar del mal pronóstico, sobre todo si se ha producido metástasis, se están desarrollando nuevas estrategias para su tratamiento, siendo una de las más prometedoras la terapia de inhibición de puntos de control inmunitarios. En este sentido, la proteína de muerte programada (PD-1) es una de las principales dianas en el tratamiento actual, por lo que en este estudio evaluamos y relacionamos la expresión de genes del sistema inmune con la presencia de esta proteína. Igualmente, el infiltrado linfocitario tiene un valor predictivo tanto en el pronóstico como en el tratamiento de este tumor. Por ello, también se estudió el perfil de expresión inmune relacionándolo con la existencia de marcadores de infiltración, en este caso CD8. Adicionalmente buscamos diferencias de expresión entre tumores delimitados y mal delimitados (infiltrados). Por último, se sabe que la presencia del polyomavirus de células de Merkel en el tumor genera grandes diferencias con respecto a los negativos para dicho virus, por lo que valoramos qué genes inmunitarios están diferencialmente expresados. En este estudio se analizó tejido tumoral parafinado de 48 pacientes proveniente del biobanco de la Fundación Instituto Valenciano de Oncología (FIVO). Para ello, utilizamos la tecnología HTG EdgeSeq®, que aporta reproducibilidad y evita sesgos durante la preparación de las muestras, permitiendo análisis robustos a partir de cantidades pequeñas de tejido. Posteriormente se secuenció y analizó estadísticamente la expresión génica en función del número de transcritos de cada gen. Obtuvimos un total de 11 genes con expresión diferencial para PD-1 positivos, 1 gen para CD8 positivos, 11 genes para tumores infiltrados y 71 para tumores con infección viral. Adicionalmente pudimos agrupar las muestras en dos clases según la expresión de los 71 genes diferencialmente expresados en la condición de polyomavirus, aunque no se pudo asociar dicha separación con ninguna de las condiciones nombradas.
- PublicationAnálisis de expresión de genes en células tumorales circulantes en tumores del tracto gastrointestinal, mediante desarrollo y validación de un ensayo de multiplexado basado en tecnología xMAP de Luminex(Universitat Politècnica de València, 2020-07-03) Sánchez Torrecilla, Francisco Javier; Sirera Pérez, Rafael; Esplugues Artola, Enric; Dpto. de Biotecnología; Centro Avanzado de Microbiología de Alimentos; Escuela Técnica Superior de Ingeniería Agronómica y del Medio Natural[ES] En este trabajo se desarrolla y valida un nuevo ensayo para el análisis de la expresión de genes en células tumorales circulantes. Este ensayo se fundamenta en el concepto de biopsia líquida que se basa en buscar marcadores en fluidos biológicos, principalmente en la sangre. La biopsia líquida se centra principalmente en la búsqueda de mutaciones en DNA tumoral circulante, es decir DNA liberado desde el tumor al torrente sanguíneo. La biopsia líquida permite realizar diagnósticos y seguimiento de pacientes con tumores sin la necesidad de realizar biopsias de tejido sólido, las cuales no son totalmente representativas de toda la población de células tumorales y además son muy invasivas. En el campo de la biopsia líquida, la detección y análisis de células tumorales circulantes despierta un gran interés. Estas células están presentes en circulación sanguínea de enfermos con diferentes tipos de tumores debido a que se desprenden del propio tumor. Al presentar un fenotipo distinto al de las células normales su perfil de expresión de genes varía. Por lo tanto, los genes expresados diferencialmente en estas células pueden ser utilizados como marcadores para el diagnóstico de tumores. Pero presentan el problema de que sen encuentran en una baja proporción en la sangre. Además, a la hora de realizar análisis de la expresión de genes, los métodos clásicos como RT-PCR son demasiado laboriosos y costosos. Esto hace que el análisis de expresión de células tumorales circulantes no se pueda trasladar a la clínica. Sin embargo, la tecnología xMAP de Luminex podría ser explotada para solventar estos problemas. Esta tecnología se basa en el uso de nanopartículas a las cuales se pueden acoplar reacciones de PCR e inmunoensayos. Estas nanopartículas son marcadas con una fluorescencia específica para cada uno de los marcadores que se quiere analizar, esto permite un análisis simultaneo de diferentes marcadores en el mismo experimento de forma eficiente y con una gran sensibilidad. Para el análisis de la expresión de genes, se acopla a cada nanopartícula una reacción de RT-qPCR específica para cada gen cuya expresión se quiere medir. El desarrollos y validación de este ensayo, se centra en tumores del tracto gastrointestinal: estómago, páncreas, colon y recto. Para ello se seleccionan genes que presentan una sobreexpresión en este tipo de tumores haciendo uso de bases de datos como GEPIA y TCGA. Seguidamente se pasa a validar la eficiencia y especificidad de los primers que permitirán medir la expresión de cada gen, todo ello en líneas celulares. Una vez hecho esto se mide la expresión de estos genes en muestras de sangre de individuos sanos como control negativo. Con los primers generados se generan las nanopartículas para el ensayo y se testan en líneas celulares. Finalmente se pone a punto un protocolo para tratar las muestras de sangre para el enriquecimiento de las células tumorales circulantes y extraer su RNA para el análisis de expresión con las nanopartículas.
- PublicationAnálisis de la calidad de aire interior en función de la tipología de ventilación. Aplicación al prototipo E3 (edificación eco-eficiente) de la UPV(Universitat Politècnica de València, 2017-07-18) Sáez Cifre, Eva; Guillén Guillamón, Ignacio Enrique; Jiménez Belenguer, Ana Isabel; Dpto. de Física Aplicada; Dpto. de Biotecnología; Escuela Técnica Superior de Arquitectura; Centro Avanzado de Microbiología de Alimentos; Centro de Tecnologías Físicas: Acústica, Materiales y Astrofísica; Escuela Técnica Superior de Ingeniería Agronómica y del Medio NaturalEl proyecto se define en dos partes. En la primera parte se redacta el marco teórico y normativo tanto de la calidad del aire interior como del teletrabajo; la segunda parte, se aplica este marco teórico para llevar a cabo la toma de muestras del aire interior en un puesto de trabajo de oficina en un edificio destinado a vivienda situado en la UPV, para definir así qué tipología de ventilación es la más adecuada en este puesto de trabajo en concreto. Así pues, se analiza el contexto teórico y normativo en el que se encuentra en la actualidad, tanto la calidad de aire interior como el teletrabajo. Se recopilará información acerca de los tres agentes que intervienen en la calidad del aire interior: agentes biológicos, químicos y físicos. Así mismo, la relación de cada agente con los efectos en la salud. Con la finalidad de enmarcar este estudio dentro de un ambiente laboral, se enfoca a las nuevas modalidades de empleo que surgen con el avance de las tecnologías. Esta nueva modalidad se refiere al ¿Teletrabajo¿. Se definen las particularidades, analizando ventajas y desventajas del mismo, enfocado a los riesgos que puede conllevar a nivel psicosocial. Intentando enlazar los riesgos de seguridad y salud con la calidad del aire al que el teletrabajador estará expuesto, al menos 8 horas diarias. Para realizar la toma de muestras se elabora una metodología basada en el estudio teórico realizado. Las muestras tomadas definen la concentración de Agentes Biológicos (Viables, Mohos y Levaduras.) y Partículas (identificadas por tamaños) presentes en el aire, y se relacionan con otros factores (tipo de ventilación, temperatura, humedad relativa, velocidad del aire y estación del año) La metodología contempla la toma de muestras en diferentes tipologías de ventilación, con la finalidad de cuantificar la cantidad de microorganismos y particular en el aire en función de si la vivienda/oficina se encuentra sin ventilación, con ventilación forzada o con ventilación natural. Una vez obtenidos todos los datos se ha efectuado un análisis de los mismos, se ha elaborado una comparación de la cantidad de microorganismos y partículas muestreadas con las cantidades reflejadas en la normativa y se han obtenido conclusiones tanto a nivel normativo como en comparación de los datos que se obtienen. Por ello, la última finalidad de este proyecto es definir qué ventilación debería utilizar el teletrabajador. teniendo en cuenta las condiciones y particularidades del entorno en el que se sitúa, para así que esté expuesto a una calidad del aire interior óptima. Además, por todos los datos muestreados se ha intentado establecer una línea de comportamiento de los Agentes en función de las otras variables, para extrapolar los resultados obtenidos en un periodo concreto a los futuros periodos, suponiendo que no hay variación el entorno.
- PublicationAnálisis de la competencia entre las cepas comunes de Legionella pneumophila ST1, ST23 y ST587(Universitat Politècnica de València, 2015-01-19T14:23:59Z) Sánchez López, Itziar Ainhoa; Ferrús Pérez, María Antonia; González Candelas, Fernando; Dpto. de Biotecnología; Centro Avanzado de Microbiología de Alimentos; Escuela Técnica Superior de Ingeniería Agronómica y del Medio Natural[ES] L. pneumophila es una bacteria gram-positiva que vive en ambientes húmedos y se transmite por el aire. Se trata de una bacteria patógena para el ser humano. Existe una gran variedad de cepas, siendo la más frecuente la ST1. Analizando aislados tanto clínicos como ambientales mediante técnicas de secuenciación del ADN se han encontrado diferencias en cuanto a la presencia mayoritaria de varias cepas. En concreto, la ST1 se localiza, principalmente, en las muestras ambientales, mientras que la ST23 y ST578 en muestras clínicas de Calpe y Alcoy, respectivamente, lo que complica la identificación de las fuentes ambientales de los brotes de legionelosis. Estos resultados sugieren que existe un tipo de selección que se origina durante el cultivo de los aislados en el laboratorio. El trabajo presentado consiste en realizar un ensayo sobre la eficacia relativa (“relative fitness”) de estas tres cepas en competencia, para determinar si existen diferencias entre ellas entre las frecuencias iniciales y las detectadas tras someterlas a condiciones de cultivo in vitro estándar. Los resultados preliminares dejan entrever una posible competencia entre las distintas cepas, siendo la ST1 la que predomina sobre las otras dos y la ST23 predomina a su vez sobre la ST578. Esto explicaría la hipótesis de partida sobre las conclusiones extraídas de los aislados de Calpe y Alcoy. Sin embargo, todavía queda un largo trabajo de comprobación y de extraer más resultados para confirmar la hipótesis.
- PublicationAnálisis de la dinámica de activación de células madre neurales en condiciones de regulación metabólica(Universitat Politècnica de València, 2024-09-04) Hernández Maciá, Miriam; Giraldo Reboloso, Esther; López Fabuel, Irene; Dpto. de Biotecnología; Centro Avanzado de Microbiología de Alimentos; Escuela Técnica Superior de Ingeniería Agronómica y del Medio Natural[ES] Las células madre neurales (NSCs), localizadas en dos nichos neurogénicos en el cerebro adulto de roedores, pueden encontrarse en diferentes estados de activación, que van desde un estado quiescente, no proliferativo (qNSCs), hasta un estado con proliferación activa (aNSCs) (Cheung and Rando et al., 2013). Conocer los factores responsables de la activación de las NSCs podría permitir regular la neurogénesis. Uno de los factores que controla la activación de las NSCs es el metabolismo. Así, se ha observado cómo el estado quiescente es dependiente de la glucólisis y la oxidación de los ácidos grasos, mientras que el estado activado lo es de la fosforilación oxidativa (Codega et al., 2014; Knobloch et al., 2017). En este trabajo, hemos estudiado el papel de la glucólisis para la inducción y el mantenimiento del estado quiescente de las NSCs adultas en los diferentes nichos neurogénicos. Para ello, hemos utilizado un ratón condicional para eliminar la enzima proglucolítica 6-fosfofructo-2-quinasa/fructosa-2,6-bisfosfatasa isoforma 3 (Pfkfb3LoxP/LoxP) en células madre neurales, gracias al empleo del ratón GFAP::Cre. Los resultados muestran como en la edad adulta se produce una reducción en el número de NSCs en ambos nichos neurogénicos. Además, en el caso de la zona subependimaria los resultados sugieren una mayor diferenciación de las NSCs a neuronas y astrocitos. En conjunto, estos resultados evidencian cómo el metabolismo glucolítico es necesario para el mantenimiento de las NSCs en su estado indiferenciado.
- PublicationAnálisis de la expresión de genes inmunorelacionados como biomarcadores pronósticos en pacientes con cáncer de pulmón en estadios resecables(Universitat Politècnica de València, 2019-05-08) Moreno Manuel, Andrea; Jantus Lewintre, Eloisa; Calabuig Fariñas, Silvia; Dpto. de Biotecnología; Centro Avanzado de Microbiología de Alimentos; Escuela Técnica Superior de Ingeniería Agronómica y del Medio Natural[ES] El cáncer de pulmón es la principal causa de muerte debida a cáncer a nivel mundial, siendo el cáncer de pulmón no microcítico (CPNM) el principal subtipo histológico, ya que representa el 80% de los casos de cáncer de pulmón. El sistema inmune juega un papel clave en la prevención, desarrollo y tratamiento del cáncer y, por ello, las nuevas inmunoterapias han permitido obtener buenos resultados y prolongar la supervivencia del CPNM. Por tanto, se necesita más investigación del microambiente tumoral del CPNM, ya que daría lugar al descubrimiento de nuevos biomarcadores y dianas terapéuticas. El principal objetivo de este trabajo es analizar el valor pronóstico de 6 genes inmunorelacionados (CD3D, CD3E, CD4, CD5, CD6 y CD8). Para ello, se analizó una cohorte de prueba, compuesta por 186 muestras pareadas de tejido fresco normal y tumoral de pacientes con CPNM resecado. La expresión génica relativa se determinó mediante RTqPCR y se calculó siguiendo la fórmula de Pfaffl utilizando ACTB, CDKN1B y GUSB como controles endógenos. Se utilizaron tests no paramétricos para establecer correlaciones entre la expresión génica y las características clinicopatológicas, y se analizó la supervivencia mediante análisis de regresión univariante de Cox y curvas Kaplan-Meier (test log-rango); para establecer biomarcadores pronóstico independientes se realizó un análisis multivariante de regresión de Cox. La cohorte de validación se obtuvo de la base de datos TCGA. Se consideró significativo p<0,05. Los análisis de supervivencia de la cohorte de prueba asociaron mayores niveles de expresión de CD5 con mejor pronóstico para supervivencia libre de recaída (SLR, 44.30 vs. 29.2 meses, p=0.076) y supervivencia global (SG, 99.90 vs. 49.63 meses, p=0.013). El análisis multivariante confirmó que la expresión de CD5 tenía valor pronóstico como biomarcador independiente para SG en estadios tempranos de CPNM (HR, 0.554; 95% IC 0.360-0.853; p=0.007). Los análisis de supervivencia realizados en los 97 pacientes de la cohorte de validación confirmaron que mayores niveles de expresión tanto de CD5 como de CD6 tenían valor pronóstico significativo para SLR (34.98 vs. 75.57 meses, p=0.033; 25.31 vs. 75.57 meses, p=0.020, respectivamente) y SG (40.49 vs. 77.97 meses, p=0.038; 39.02 vs. 77.97 meses, p=0.034, respectivamente). Por lo tanto, estos análisis apoyan que los pacientes de CPNM con mayores niveles de expresión de CD5 están asociados con mejor pronóstico, y, además, sugieren que CD6 podría ser un biomarcador pronóstico. Por tanto, el estudio del perfil inmune en CPNM en estadios resecables y posterior validación utilizando la base de datos TCGA ha permitido establecer CD5 como biomarcador pronóstico independiente en CPNM.
- PublicationAnálisis de la expresión de marcadores de senescencia en el íleon de pacientes con enfermedad de Crohn(Universitat Politècnica de València, 2023-10-04) Plaza Soriano, Javier; Jantus Lewintre, Eloisa; Barrachina Sancho, María Dolores; Macias Ceja, Dulce Carolina; Dpto. de Biotecnología; Centro Avanzado de Microbiología de Alimentos; Escuela Técnica Superior de Ingeniería Agronómica y del Medio Natural[ES] La enfermedad de Crohn (EC) es una patología inflamatoria multifactorial, crónica y recidivante del tracto gastrointestinal. En un alto porcentaje de pacientes, la enfermedad se asocia con complicaciones como la estenosis o la aparición de fístulas para las que no existe ni prevención ni tratamiento. En muchos casos, estos pacientes requieren cirugía que tampoco es curativa por lo que resulta necesario continuar investigando sobre la etiopatogenia de esta patología y de sus complicaciones. En los últimos años se ha visto que la senescencia celular desempeña un papel en la etiopatogenia de la fibrosis en órganos como el pulmón o el hígado. Sin embargo, se sabe poco de este proceso celular en la EC. Debido a los datos arrojados anteriormente, este trabajo se centró en el estudio de la expresión génica y proteica de diferentes marcadores relacionados con la senescencia celular, concretamente ETS1 y p16 (CDKN2A) en resecciones ileales de pacientes con EC. Los resultados obtenidos mostraron que la expresión de marcadores de senescencia celular está incrementada en tejido ileal afecto de pacientes con EC complicada, en comparación con los sujetos control. El análisis inmunohistoquímico mostró que ETS1 se expresa en células leucocitarias y epiteliales del íleon no afecto y en fibroblastos localizados en la submucosa del íleon afecto por esta patología. Este mismo análisis mostró poca tinción de P16, que se localiza en algunas células mesenquimales del íleon afecto de EC. En conjunto, nuestros datos sugieren presencia de senescencia celular en íleon afecto de pacientes con EC complicada y su confirmación en una cohorte mayor, podría abrir las puertas a la utilización de nuevos fármacos en esta patología.
- PublicationAnálisis de la expresión de marcadores inmunoreguladores en tumor y estroma tumoral en cáncer de pulmón no microcítico en estadios resecables(Universitat Politècnica de València, 2014-09-26T12:21:33Z) Pérez Marcos, Juan José; Sirera Pérez, Rafael; Jantus Lewintre, Eloisa; Dpto. de Biotecnología; Centro Avanzado de Microbiología de Alimentos; Escuela Técnica Superior de Ingeniería Agronómica y del Medio Natural[EN] Regulatory T ymphocytes (Tregs) play a critical role in immune tolerance to tumor cells. Several molecules, including CD127, CD25, CTLA-4, IL-10, LAG3, GITR, TNFα, CD4, CD8 y TGFβ-1have been reported markers of Tregs. Another highly specific marker for Tregs is FOXP3. The aim of this study was to determine the expression of these genes by RTqPCR and determining the presence of FOXP3 in the tumor stroma and tumor by immunohistochemistry (IHC), with the aim to correlate the results with clinicopathologic and prognosis variables in NSCLC. Because, there is more evidence that recognize the role of the tumor stroma in both tumor progression and in the migratory capacity of immunoregulatory cells to the tumor.
- PublicationAnálisis de la expresión de moléculas de adhesión en cultivos celulares primarios derivados de pacientes con cáncer de pulmón de células no pequeñas(Universitat Politècnica de València, 2018-07-18) Piqueras Nebot, Marta; Sirera Pérez, Rafael; Jantus Lewintre, Eloisa; Calabuig Fariñas, Silvia; Dpto. de Biotecnología; Centro Avanzado de Microbiología de Alimentos; Escuela Técnica Superior de Ingeniería Agronómica y del Medio Natural[ES] El cáncer de pulmón no microcítico (CPNM) representa el 85% de los casos de cáncer de pulmón, enfermedad que supone la segunda causa de muerte a nivel nacional. Esta elevada mortalidad está relacionada entre otros factores con la aparición de resistencias a los tratamientos, a su vez asociada con la existencia de una subpoblación de células llamadas células madre tumorales. De ahí, el interés por establecer marcadores específicos que permitan la caracterización de estas células y de esta forma poder diseñar estrategias terapéuticas dirigidas específicamente contra ellas. Para ello, se han desarrollado métodos de cultivo de estas células madre tumorales basándose en su capacidad para formar esferas en condiciones no adherentes y medio libre de suero. Sin embargo, se ha observado que el fenotipo que las tumoresferas adquieren en los cultivos 3D es variable y se piensa que puede estar correlacionado con la expresión de genes implicados en la adhesión celular. Este trabajo se realizó en 7 muestras tumorales de pacientes resecados con CPNM y en 12 líneas celulares crecidas en monocapa y en placas de baja adherencia con medio sin suero (tumoresferas). La expresión de genes relacionados con la adhesión celular (CLDN1, CLDN3, CLDN4, CLDN6, CLDN7, CLDN8, CLDN14, Vcam1, OCLN, JAM1, GJA1, GJB6, EPCAM, CDH1, VIM, ITGA2, ITGA6, ITGB1 y CTNNB1) se analizó mediante PCR cuantitativa a tiempo real (qPCR), normalizándose frente a la expresión de tres genes controles seleccionados: ACTB, CDKN1B y GUSB, utilizados para el cálculo de la expresión relativa y un ADNc de referencia comercial. Las tumoresferas de pulmón presentaron una expresión incrementada de CLDN4, CDH1 y ITGA6 (p= 0,05, p= 0,049 y p= 0,002, respectivamente) comparadas con sus correspondientes células crecidas en adherencia. Asimismo, el estudio de las posibles correlaciones entre los genes mostró un patrón de coexpresión entre la mayoría de ellos ya que están implicados en el mismo proceso de adhesión celular, siendo estas correlaciones estadísticamente significativas entre CLDN3-CLDN4 (p=0,001), CDH1-CTNNB1 (p=0,008) o VIM-EPCAM (p=0,012). Por otra parte, el análisis de la expresión génica relativa demostró también que la sobreexpresión de E-cadherina y Conexina 43 se relaciona con la formación de tumoresferas compactas, mientras que la expresión aumentada de la integrina b6 se asocia con la obtención de agregados laxos de CSCs. Con todo ello, se propone la modulación de la expresión de los genes involucrados en la adhesión celular que condicionan la morfología de los esferoides de CSCs como una opción terapéutica para tratar a los pacientes con CPNM.
- PublicationAnálisis de la expresión génica relativa de las vías Notch, Wnt y Hedgehog en cancer stem cells en cáncer de pulmón no microcítico(Universitat Politècnica de València, 2015-10-20) Palomar Rios, Andrea; Jantus Lewintre, Eloisa; Calabuig Fariñas, Silvia; Dpto. de Biotecnología; Centro Avanzado de Microbiología de Alimentos; Escuela Técnica Superior de Ingeniería Agronómica y del Medio Natural[ES] En Cáncer de Pulmón, la supervivencia global no supera el 15% a los cinco años. Incluso disponiendo de terapias individualizadas, la adquisición de resistencias a los tratamientos es una de las causas principales de su elevada mortalidad. Actualmente, se postula que las responsables de las recurrencias/ resistencias que ocurren en estos pacientes son las Células Madre Tumorales (CSCs). Por tanto, el objetivo de este proyecto es la identificación de marcadores de CSCs en muestras de cáncer de pulmón no-microcítico que nos permitan su aislamiento y la correlación con variables clínicopatológicas, y pronósticas de los pacientes. Además, a partir de las CSC aisladas realizaremos estudios de cribado farmacológico,con la finalidad de poder diseñar estrategias terapéuticas más racionales destinadas a lograr la eliminación de la población de CSCs, y poder trasladar nuestros hallazgos a la clínica con el fin de individualizar los tratamientos y mejorar el curso clínico de los pacientes afectado
- PublicationAnálisis de la integridad del DNA libre circulante en orina como biomarcador diagnóstico de cáncer vesical.(Universitat Politècnica de València, 2021-12-22) Herranz Gómez, Raquel; Sirera Pérez, Rafael; Medina Badenes, Pilar; Dpto. de Biotecnología; Centro Avanzado de Microbiología de Alimentos; Escuela Técnica Superior de Ingeniería Agronómica y del Medio Natural[ES] El cáncer de vejiga es el noveno cáncer más común en el mundo, ocupando el puesto 13 con respecto a la mortalidad por cáncer al año. Los métodos de diagnóstico disponibles incluyen tomografía computarizada (TC), resonancia magnética o PET (tomografía por emisión de positrones), que implica una alta radiación para el paciente. Dado que no existen métodos no invasivos para diagnosticar tumores urológicos como el cáncer de vejiga, la búsqueda de nuevos biomarcadores de diagnóstico que permitan monitorizar la enfermedad y predecir la respuesta de la terapia o la resistencia sin intervención invasiva y que además sean económicos y fáciles de detectar es extremadamente necesaria. Las biopsias líquidas tienen el potencial de llenar este vacío, ya que la obtención de muestras es sencilla y mínimamente invasiva. El ADN libre circulante (cfDNA) proviene de células que han muerto, ya sea por apoptosis o por necrosis. En el ambiente tumoral, se produce una mayor proporción de muerte por necrosis que por apoptosis, es decir, se produce principalmente una muerte celular no programada. El resultado de esos diferentes tipos de muerte causa un grado de fragmentación diferente del ADN y el grado de integridad podría representar un biomarcador diagnóstico-pronóstico para diferentes tumores urológicos. En este estudio nos centramos en el cáncer de vejiga, y para ese propósito seleccionamos 83 individuos, 63 pacientes con cáncer vesical en diferentes estadios y 20 controles sanos, pareados por edad y sexo. De cada paciente recolectamos 3 muestras de orina diferentes: antes de la cistectomía, tres meses después y al año después de la cirugía. De los controles recogimos una muestra de orina. En este estudio analizamos la integridad del DNA presente en la orina de los pacientes antes de la cistectomía y lo comparamos con el de los controles sanos. Aislamos el cfDNA de la orina y cuantificamos el nivel de expresión de fragmentos grandes y pequeños de 5 genes, ACTB, BCAS1, STOX1, c-MYC y AR por PCR cuantitativa en tiempo real.
- PublicationAnálisis de los riesgos higiénicos en una empresa del sector ovino(Universitat Politècnica de València, 2014-11-26T12:47:54Z) García Saiz, Pablo; Gómez Moya, Luís; García Hernández, Jorge; Dpto. de Ingeniería Rural y Agroalimentaria; Dpto. de Biotecnología; Centro Avanzado de Microbiología de Alimentos; Escuela Politécnica Superior de Gandia; Escuela Técnica Superior de Ingeniería Agronómica y del Medio Natural; Grupo de Mecanización y Tecnología Agraria[EN] Employees of companies who work with animals have a hygienic risk associated with zoonoses, group of animal diseases which are transmitted to humans by direct infection with the sick animal, through some bodily fluids such as urine or saliva, or by presence of an intermediary insect. In addition, some microorganisms which may be hazardous to worker can exist in the workplace. Studied exploitation, work activities carried out do not involve manipulation or deliberate biological agent use, however this can become the worker through contact with infected animals or humans, through the processing of its products, or through contact with items or media where the actor lives or can survive (materials, water, soil(, air, food, fomites, waste...), serving all of them as sources of exposure. We will have to take into account the environmental quality of the work environment, since it is also important as a possible source of microbiological exposure to workers. The main objective of the work has been identifying and analyzing the General hygienic risks of this company of the sheep sector and production of dairy products. For this purpose it was necessary to know the company and the production process of the same, and can thus decide how should be the necessary samples for evaluation. All subsequent analyses performed using the official methods, analyzing them in laboratories in the Area of Microbiology the Department of biotechnology of the University Polytechnic of Valencia. The results will show that there are a lot of hygienic risks due to the daily contact with animals and the places where they are confined. Together you'll get environmental microbiological contamination level is quite high, still need to have a more exhaustive control of risks that this contamination can occur in workers; It will be necessary to implement preventive and exploitation control measures that can limit exposure, as you need to purchase and establish the use of personal protective equipment for workers.
- PublicationAnálisis de los riesgos laborales y estudio higiénico cualitativo y cuantitativo de la Granja de Reproducción Genética en Cunicultura de la Universitat Politècnica de València(Universitat Politècnica de València, 2017-12-13) Gonzales Benitez, Cintia; García Hernández, Jorge; Palomares Atienza, Jose Daniel; Torres Lozano, Ceferino; Dpto. de Biotecnología; Centro Avanzado de Microbiología de Alimentos; Escuela Técnica Superior de Ingeniería Agronómica y del Medio NaturalIn recent years the rabbit farms in Spain have been reduced, but also it has come to occupy the second place in meat production in Europe, professionalizing the development of rabbit farms, as well as the generation of new safety and hygiene conditions in the workplace. According to the information provided by the General Subdirectorate of Statistics and the Observatory of Occupational diseases, through CEPROSS, division 01 of the section Agriculture, stockbreeding, forestry and fishing, to which belongs the classification CNAE of our object of study, it represents the 84.3% of accidents of work and 86% of occupational illnesses of the section that in the last years has been increasing, being the minor accidents and illnesses caused by the physical agents of the group 2 predominant. It should be noted that the index of incidents in the agrarian sector for the year 2015 took the second place. The present final master's work has as main objective to analyze the occupational risks and make a hygienic study in the Farm of Genetic Improvement in Rabbit breeding of the UPV With a general and specific method, as well the analysis of possible occupational diseases that may be exposed a rabbit breeder, in order to improve the safety and health of workers through the adoption of preventive and corrective measures and serve as a model for future evaluations in the same sector. In the analysis of professional diseases by causal agent, it was found that the greatest incidences in the Section are diseases caused by forced postures and repetitive movements. However, according to the tasks performed by the rabbit breeder and working conditions, the most relevant diseases are those caused by the contact and inhalation of substances of high molecular weight, diseases such as labor asthma, contact dermatitis and occupational diseases caused by biological agents such as Tularemia, Tinea, Pasteurelosis, toxoplasmosis and exanthemic fever of the Mediterranean. The results of the general evaluation gives us a broad view of the level of risk to which the rabbit breeder is exposed by risk factor and task performed, obtaining some moderate and important risk levels in which to act in the short and medium term, however the hygienic and ergonomic risk factors were analyzed by a specific method to compare them with the limits established in regulation and thus determine their level of risk.